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骨切片

骨切片
Bone Slices

【產品名稱】

通用名稱:骨切片

英文品名: bone slices

【預期用途】

用于傳統染色法和培養基ELISACrossLaps)骨破壞重吸收的體外精確檢測

【產品簡介】

骨是一種很有活力的組織,在人的一生中都在不斷地重建。現已證實,在骨中存在一些特殊物質,能夠影響到破骨細胞的活性。因此我們使用高質骨而不是牙質應用于研究。現在將向我們的客戶提供此類服務。

每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質量。在該檢測中,由骨切片上產生凹點證明破骨能力。隨后用培養基酶免吸附試劑盒Crosslaps檢測上清液。只有當兩項測試都呈陽性時,該骨切片才能用于進一步的重吸收檢測。

破骨細胞產生凹點的活性通過人破骨重吸收方法檢測。對破骨重吸收的定量分析可以采用傳統的對凹點染色方法,亦可使用培養基酶免吸附檢測法Crosslaps

由于破骨細胞實驗往往需要較大量的蛋白質,而從牛骨切片中提取的蛋白質用于96孔板

將人破骨細胞分散覆蓋于牛骨皮質片上,然后加入不同濃度的抗重吸收劑(A: 90 μM, B: 30 μM, C: 10 μM, D: 0 μM)。第6天取等量細胞培養上清液用于檢測膠原c端交聯肽(ctx)的量(培養基ELISA-CrossLaps,從骨片上轉移破骨細胞并且用阻凝蛋白蘇木精染色,形成可見的凹點(圖1)。

我們正使用這種6孔板大骨片(GBS)來提取破骨細胞蛋白,這些破骨細胞在骨上而非塑料上培養,對蛋白質的表達是有影響的(數據未列出)。要進行破骨細胞的基因描述實驗時,我們推薦使用這些底物提取RNA。從骨切片分離RNA的方案和人破骨細胞的培養方案可根據要求制定。

【來源】

骨切片由牛股骨的皮質部分制成,完全適合96孔板,直徑6mm,大概200μm厚。

【儲存】

骨切片保存于4°C70%乙醇中。為了保持骨切片的質量,應縮短使用周期和避免室溫下放置。

【處理】

我們推薦在轉移至96孔板之前,先將骨切片置于含培養基的10%血清中清洗三次。

【培養】

重吸收實驗一般持續72小時。然而在加入試劑到破骨細胞培養液中1624小時后,就可觀察到細微的變化了,甚至8小時后即可用相應方法觀察到。

【特征】

與凹點染色和劃線不同,培養基酶免吸附法Crosslaps不要求破骨細胞培養的終止。因此,可以從相同的股切片中獲得幾個樣品,從而使互換性檢測特定物質影響下的破骨細胞活性成為可能。材料的處置與常見細胞培養物的處置相同。

【參考文獻】

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2.       HOLLBERG ET AL. EXP CELL RES 279:227-238 (2002).

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5.       SCHALLER ET AL. J BONE MINER RES 19:1144-1153 (2004)

6.       STROUP ET AL. J BONE MINER RES 16:1739-1746 (2001).

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